FISH на парафиновых срезах биопсии рака молочной железы и рака желудка (Амплификация ERBB2 (Her-2/Neu) - раздела Молекулярно-генетические исследования в области онкологии

HER2/neu (human epidermal growth factor receptor 2; рецептор эпидермального фактора роста, тип 2) — мембранный белок, кодируемый геном человека ERBB2. При некоторых типах злокачественных новообразований довольно часто наблюдается амплификация этого гена, то есть увеличение количества его копий в геноме опухолевой клетки. Амплификация определяется методом FISH (флуоресцентная гибридизация in situ), который позволяет визуализировать все копии определяемого гена. Определение статуса амплификации HER2/neu (является ли опухоль HER2/neu-положительной или отрицательной) позволяет определить прогноз развития онкологического заболевания, а также помогает в выборе терапии. HER2/neu-положительные опухоли хорошо отвечают на таргетную (target — мишень) терапию антителами к белку HER2/neu.

HER2/neu (human epidermal growth factor receptor 2; рецептор эпидермального фактора роста, тип 2) — мембранный белок, член семейства рецепторов эпидермального фактора роста HER/EGFR/ERBB, кодируемый геном человека ERBB2. Для некоторых типов опухолей характерна гиперэкспрессия гена HER2/neu, обычно вызванная его амплификацией.

Определение статуса экспрессии и амплификации HER2/neu (является ли опухоль HER2/neu-положительной или отрицательной) позволяет определить прогноз развития онкологического заболевания, а также помогает в выборе терапии. При наличии гиперэкспрессии и амплификации HER2/neu назначается таргетная терапия гуманизированными моноклональными антителами к белку HER2/neu. Статус HER2/neu определяют в рамках первичной диагностики рака молочной железы и желудка.

Стандарты HER2/neu-тестирования, в которых прописан четкий алгоритм его проведения и интерпретации результатов, изложены в рекомендациях Американского общества клинической онкологии и Коллегии американских патологов (ASCO/CAP).

На первом этапе HER2/neu-тестирования проводится иммуногистохимическое (ИГХ) исследование экспрессии HER2. Результаты ИГХ-реакции оценивают в баллах от 0 до 3+. Опухоли с оценками 0 и 1+ считаются негативными и не подлежат лечению таргетными препаратами, результат 2+ считается неопределенным и требует проведения исследования амплификации гена HER2/neu с помощью гибридизации in situ (ISH – FISH или его аналогами), оценка 3+ обозначает HER2/neu-положительные опухоли.

На следующем этапе проводится определение амплификации гена HER2/neu методом ISH для опухолей с оценкой 2+. В методе FISH случаи с ≥6 копий HER2 и с соотношением HER2/CEP17 ≥2 считаются положительными. При подтвержденной амплификации HER2/neu и в случаях, когда ИГХ-исследование опухоли дало оценку 3+, пациентам показано назначение одного из вариантов таргетной терапии с использованием различных анти-HER2/neu-препаратов.

Для исследования ДНК используется предварительно подготовленный биологический материал (парафиновый блок с образцом ткани).

Непригодные для исследований образцы, приготовленные с использованием фиксаторов: Зенкера, Карнуа, Буэна, В-5, а также обработанные кислыми растворами, декальцифицирующими костную ткань.

По возможности образцы, предназначенные для выделения ДНК/РНК, не окрашивать (допустима окраска только крезилвиолетом).

 

Обращаем внимание, что на результаты исследования ДНК могут повлиять следующие факторы:

• в случае недостаточного объема пораженной ткани во взятом образце может быть получен ложноотрицательный результат;
• переливание крови или трансплантация костного мозга, стволовых клеток, органов и тканей, которые проводились в недавнем времени (в данном случае исследование ДНК не рекомендуется проводить в течение, как минимум, 1 месяца после трансплантации или переливания крови);
  
• контаминация образца чужим генетическим материалом (все манипуляции с образцами биологического материала рекомендуется проводить в стерильных перчатках)
  

Для выполнения данного исследования используются образцы ткани, зафиксированные в формалине и заключенные в парафиновый блок

 

Толщина образца

Оптимальная толщина образца ткани не должна превышать 5 мм

 

Заливка и фиксация биологического материала

Фиксацию препарата проводить при температуре +4...+10 °С, используя буферный раствор формалина. Процесс фиксации не должен превышать 24 часов (при фиксации ткани в течение 72 часов образуются необратимые сшивки в нуклеиновых кислотах, которые осложняют дальнейшие исследование ДНК/РНК). Соотношение количества формалина к ткани должно быть 10:1. Перед заливкой ткани в парафин нужно убедиться, что образец полностью обезвожен (остаточная вода может вызвать деградацию ДНК/РНК). Для заливки использовать парафин с низкой температурой плавления без примесей.

• По возможности образцы, предназначенные для выделения ДНК/РНК, не окрашивать (допустима окраска только крезилвиолетом).

• Непригодны для исследований образцы, приготовленные с использованием фиксаторов: Зенкера, Карнуа, Буэна, В-5, а также обработанные кислыми растворами, декальцифицирующими костную ткань.

 

Маркировка

На этикетке должна быть четко и разборчиво нанесена следующая информация, идентифицирующая образец биологического материала:

• фамилия, имя, отчество пациента;

• пол и возраст пациента;

• индивидуальный штрих-код пациента медицинского учреждения, если таковой имеется

 

Условия хранения

Парафинизированные образцы хранить в течение года при температуре от 0 до +10 °С (допустимо хранение при температуре +10 до +25°С) в специальном контейнере, предотвращающем попадание влаги и механические повреждения, при условии отсутствия попадания прямых солнечных лучей

 

Условия транспортировки

Транспортировку БМ следует осуществлять при температуре, соответствующей температуре хранения образца, в специальном контейнере, предотвращающем попадание влаги и механические повреждения, при условии отсутствия попадания прямых солнечных лучей

 

ВНИМАНИЕ!

Во избежание неопределенного результата генетические исследования не проводятся:

• после пересадки костного мозга, стволовых клеток, органов и тканей;
• после процедуры переливания крови в течение 3-х месяцев после проведения процедуры.