Генетическая предрасположенность к бронхиальной астме - раздела Иммунология

IL4, IL4R, TNF, ADRB2

Бронхиальная астма – распространенное заболевание, этим заболеванием страдает до 5% населения. Чаще встречается у детей, но во многих случаях со временем проходит. У взрослых бронхиальная астма является хроническим состоянием, требующим постоянного лечения. В основе заболевания лежит повышенная чувствительность бронхов к различным раздражителям, в результате которой происходит сужение просвета бронхов. Обструкция при астме обычно возникает эпизодически при непосредственном контакте с раздражителем, при тяжелой форме обструкция часто сохраняется и между приступами.

Ген IL4 

Кодирует плейотропный цитокин, продуцируемый активированными Т-клетками, являющийся основным цитокином Th2 иммунного реагирования и приводящий к развитию атопии, определяя продукцию антител IgЕ к этиотропным аллергенам. Этот цитокин представляет собой лиганд для рецептора IL-4. Наличие мутантного аллеля -589T приводит к повышению уровня продукции IL-4, что способствует угнетению клеточного иммунитета и повышению уровня IgE. Это является одним из ведущих факторов риска развития как аллергической, так и инфекционно-зависимой бронхиальной астмы.

Ген IL4R 

Кодирует альфа-цепь рецептора интерлейкина-4, тип I – трансмембранный белок, который может связывать IL-4 и IL-13, регулируя таким образом выработку IgE. Кодируемый белок также может способствовать дифференциации клеток Th2. Аллельные варианты этого гена связаны с атопией, которая может проявляться как аллергический ринит, синусит, астма или экзема. Миссенс-мутация 576Arg гена α-цепи рецептора к IL-4 приводит к образованию формы рецептора, обладающей пониженным сродством к внутриклеточной тирозинфосфатазе SHP-1, включающей сигнал терминации транскрипции гена IL4. Таким образом, наличие мутантного аллеля 576Arg связано с потерей возможности к супрессии синтеза IL-4, что является фактором риска развития бронхиальной астмы.

Ген TNF 

Кодирует мультифункциональный провоспалительный цитокин, принимающий участие в широком спектре биологических процессов, таких как пролиферация клеток, дифференциация, апоптоз, метаболизм липидов и коагуляция. Этот цитокин связан с рядом патологий включая аутоиммунные и онкологические заболевания. Аллель -308A гена TNF ассоциирован с повышенным уровнем экспрессии TNF. У носителей минорного аллеля -308A риск развития бронхиальной астмы повышен в 1,5-1,7 раз по сравнению со среднепопуляционным.

Ген ADRB2 

Кодирует β2-адренорецептор. При возбуждении β2-адренорецептора обеспечивается «тормозной» эффект, выражающийся в расширении сосудов (коронарных, скелетных мышц), расслаблении гладких мышц, дыхательных путей. Полиморфизм G16R G>A не влияет на активность рецептора, но оказывает существенное влияние на механизм естественной функциональной чувствительности рецептора. Наличие мутантного аллеля G16R G>A не связано с предрасположенностью к бронхиальной астме и бронхиальной гиперчувствительности в целом. Однако, была показана ассоциация этого варианта с риском развития ночной формы бронхиальной астмы и тяжелой формы бронхиальной астмы для гетерозигот и, особенно, для гомозигот. При регулярном использовании бронходилататоров рецептор с заменой ADRB2*16Gly быстрее теряет восприимчивость как у взрослых, так и у детей, поэтому пациенты, гомозиготные по этому варианту гена, быстрее теряют чувствительность к этим препаратам и нуждаются в терапии кортикостероидами.

Взятие образцов венозной крови для исследования ДНК может производиться в любое время суток, прием пищи или специальная диета не повлияют на результат. 

Обращаем внимание, что на результаты исследования ДНК могут повлиять следующие факторы:

• переливание крови или трансплантация костного мозга, которые проводились в недавнем времени (в данном случае исследование ДНК не рекомендуется проводить в течение, как минимум, 1 месяца после трансплантации или переливания крови);
• контаминация образца чужим генетическим материалом (например, при взятии и транспортировке), поэтому все манипуляции с образцами биологического материала рекомендуется проводить в стерильных перчатках.

Взятие образцов буккального эпителия осуществляется в любое время суток. 

• Требуется воздержаться от еды, питья, а также курения за полчаса до сбора образцов.
• Непосредственно перед взятием образцов тщательно прополоскать рот чистой водой без использования гигиенических средств для полости рта. Подождать пару минут, чтобы во рту накопилась слюна.
• У детей, находящихся на грудном вскармливании, образцы следует брать через 30 минут после кормления.
• Непосредственно перед взятием образца младенцу необходимо дать попить воды из бутылочки.
• Перед взятием образца наденьте стерильные перчатки. Постарайтесь не дотрагиваться до конца зонда с щеточкой.

Обращаем внимание, что на результаты исследования ДНК могут повлиять следующие факторы:

контаминация образца чужим генетическим материалом (например, при взятии и транспортировке), поэтому все манипуляции с образцами биологического материала рекомендуется проводить в стерильных перчатках.

Для исключения взаимного переноса биологического материала образцы буккального эпителия должны храниться в отдельных пробирках и отдельных пакетах.

Для выполнения данного исследования используются образцы биологического материала двух типов: венозная кровь или буккальный эпителий (соскоб с внутренней поверхности щеки)

Венозная кровь

Тип пробирки: Вакуумная пробирка с ЭДТА

Минимальный объем биологического материала: 2 мл (допускается прием пробирок объемом 4-6 мл)

Процедура взятия биологического материала:

Взятие крови осуществляют из вены в положении пациента сидя или лежа. Кровь должна поступать свободным током непосредственно в вакуумную пробирку с ЭДТА (фиолетовая крышка). После взятия крови пробирку следует плавно перевернуть 5-10 раз для перемешивания с антикоагулянтом.

Центрифугирование: не требуется

Условия хранения: хранение биологического материала следует осуществлять при температуре +2…+8℃ (допускается накапливание биоматериала в заданном температурном режиме до 7 календарных дней). При более длительном хранении кровь необходимо заморозить при температуре -18…-23℃

Условия транспортировки:

Транспортировку биологического материала следует осуществлять при температуре +2…+8℃ в специальном термоконтейнере с хладагентом (синяя коробка). Замороженный биоматериал – при температуре -18…-23℃ в специальном термоконтейнере с хладагентом (красная коробка).

Не рекомендуется проводить повторное замораживание – оттаивание образцов

Буккальный эпителий (соскоб с внутренней поверхности щеки)

Взятие образцов буккального эпителия осуществляется с внутренней стороны щеки с использованием одноразовых зондов.

Требуется воздержаться от еды, питья, а также курения за полчаса до сбора образцов

Состав набора для взятия буккального эпителия:

• зонд с щеточкой, 2 шт.;
• стерильная емкость для зонда с щеточкой, 2 шт.;
• стерильные одноразовые перчатки, 1 пара;
• индивидуальный zip пакет, 1 шт.

Процедура взятия биологического материала:

Непосредственно перед взятием образцов необходимо тщательно прополоскать рот чистой водой без использования гигиенических средств для полости рта.

Подождите пару минут, чтобы во рту накопилась слюна. Наденьте стерильные перчатки. Аккуратно извлеките зонд из упаковки. Постарайтесь не дотрагиваться до конца зонда с щеточкой. Сделайте щеточкой 10-20 круговых движений по внутренней поверхности обеих щек. Извлеките зонд из ротовой полости, поместите его в стерильную сухую емкость, закройте крышку. Повторите эту процедуру вторым зондом. После взятия второго образца поместите второй зонд во вторую емкость. Обе емкости с зондами поместите в индивидуальный zip-пакет.

У детей, находящихся на грудном вскармливании, образцы следует брать через 30 минут после кормления. Непосредственно перед взятием образца младенцу необходимо дать попить воды из бутылочки.

Для исключения взаимного переноса биологического материала образцы должны храниться в отдельных пробирках и отдельных пакетах

Условия хранения : при температуре +18+25℃

Условия транспортировки: 

транспортировку биологического материала следует осуществлять при температуре +18+25℃