Тест по выявлению IgG к SARS-CoV-2. Подробнее

Разработка тест-системы для подтверждения мутации методом секвенирования по Сэнгеру (1 мутация) - раздела Молекулярно-генетические исследования в области онкологии

Код: AL-G-335

AL-G-335

6 000 руб.

Срок выполнения: до 21 дня

Герминальные мутации передаются человеку от родителей и обнаруживаются во всех клетках его организма.

Обращаем ваше внимание, что в связи с большой сложностью исследования, стоимость рассчитывается индивидуально.

  • Описание исследования
  • Подготовка к исследованию
  • Тип биоматериала

Определение наличия герминальных мутаций выполняется один раз в жизни. Конечно, в таком случае необходимо максимально уменьшить вероятность ошибки. К сожалению, многие применяемые в настоящее время методы, в частности, технологии ДНК-микроматриц (ДНК-ЧИПы) и секвенирования нового поколения (NGS), содержат в самой своей основе небольшую вероятность ошибки. Проведение подтверждающего анализа после получения результатов этими методами является общемировой практикой и входит в рекомендации "Руководства по интерпретации данных последовательности ДНК человека, полученных методами массового параллельного секвенирования (MPS) (редакция 2018, версия 2)", которое является документом, регламентирующим интерпретацию результатов, полученных методами массового параллельного секвенирования (MPS), в Российской Федерации. Подтверждение производится методом секвенирования по Сэнгеру, который до сих пор является "золотым стандартом" молекулярной биологии.

 

Ряд молекулярно-генетических методик, применяемых в современной медицинской практике для поиска герминальных мутаций, содержат в основе своего принципа вероятность небольшого процента ошибок (в частности, технологии ДНК-микроматриц (ДНК-ЧИПы) и секвенирования нового поколения (NGS)). Общепризнанным мировым стандартом является практика проведения молекулярно-генетического исследования референсным (уточняющим) методом. Таким методом обычно является секвенирование по Сэнгеру, то есть побуквенное чтение заданного участка ДНК длиной 500-1000 нуклеотидов.

Метод Сэнгера (или секвенирование путем "обрыва цепи") основан на синтезе новой ДНК-цепи на анализируемой ДНК-матрице с участием ДНК-полимеразы в присутствии праймера и смеси дезоксинуклеотидтрифосфатов (dATP, dGTP, dCTP, dTTP) и меченных разными флуоресцентными красителями дидезоксинуклеотидтрифосфатов (ddATP, ddGTP, ddCTP, ddTTP). Синтезируемая цепь обрывается при встраивании дидезоксинуклеотидтрифосфатов, называемых также терминирующими нуклеотидами (эти модифицированные трифосфаты обладают в 3'-положении водородом вместо гидроксильной группы, поэтому при их включении в ДНК происходит прекращение синтеза цепи). Поскольку "обрыв цепи" происходит статистически, то получается весь набор ДНК-фрагментов, отличающихся между собой по длине на один нуклеотид. Затем полученная смесь ДНК-фрагментов обрабатывается формамидом для денатурации (расхождения цепей ДНК) и подвергается капиллярному электрофорезу в полиакриламидном геле, в результате чего фрагменты распределяются по длине. Сканирование лазером, возбуждающим флуоресценцию красителей, которыми были помечены дидезоксинуклеотидтрифосфаты, позволяет определить последовательность нуклеотидов исходной молекулы ДНК.

 

Консультация врача-генетика для назначения исследования