Комплексная диагностика наследственной гиперхолестеринемии - раздела Наследственные заболевания

Семейная гиперхолестеринемия (СГ) - генетически гетерогенное наследственное заболевание, характеризующееся избыточной продукцией или нарушением утилизации холестерина, липопротеинов низкой (ЛПНП) и очень низкой плотности (ЛПОНП). Заболевание приводит к раннему формированию и ускоренному прогрессированию атеросклероза, что впоследствии может быть причиной развития ряда сердечно-сосудистых заболеваний. СГ обычно наследуется по аутосомно-доминантному типу и встречается с частотой от 1:200 до 1:500. В РФ насчитывается 287-700 тыс. пациентов с СГ, что составляет примерно 5% от всех пациентов с гиперхолестеринемией. Наиболее частой причиной СГ являются мутации в генах ЛПНП-рецептора (LDLR), аполипопротеина B (APOB) и белковая конвертаза субтилизина/кексина типа 9 (PCSK9).

Показания к выполнению данного исследования – повышенный холестерин в крови, аномальные показатели уровня триглицеридов и липопротеинов в крови, наличие признаков дислипидемии, атеросклероза, наличие этих нарушений или подтвержденного диагноза наследственной гиперхолестеринемии у родственников.

Ген LDLR кодирует рецептор ЛПНП, отвечающий за утилизацию ЛПНП в печени. Вследствие изменений в этом гене рецептор ЛПНП теряет способность связывать ЛПНП и те, в свою очередь, остаются долго циркулировать в кровотоке и вызывают клиническую картину атеросклероза. Мутации в гене LDLR становятся причиной более 85-90% случаев СГ. При гомозиготной мутации активность рецептора падает ниже 2%, при гетерозиготной 2-25% в зависимости от характера изменения.

Ген APOB кодирует белок аполипопротеин B, являющийся компонентом ЛПНП, ЛПОНП и хиломикронов. Синтезируясь в печени, этот пептид осуществляет транспортировку липопротеинов к тканям, а также способствует взаимодействию ЛПНП с клеточными рецепторами LDLR. В организме синтезируются две изоформы АпоB: АпоB-100 и АпоB-48. Длинный вариант АпоB-100 соответствующий 100% гена APOB синтезируется в печени и взаимодействует с рецептором ЛПНП и входит в состав ЛПНП и ЛПОНП. АпоB-48, соответствующий 48% гена APOB, синтезируется в кишечнике и входит в состав хиломикронов, и т.к. в нем отсутствует домен связывания с рецептором ЛПНП, то для деградации требуется аполипопротеин E (АпоE). Количество и характер мутаций определяют тяжесть гиперхолестеринемии.

Ген PCSK9 кодирует фермент пропротеиновую конвертазу, относящуюся к подсемейству протеиназ K семейства секреторных субтилаз. Белок PCSK9 взаимодействует с рецептором ЛПНП приводит к его деградации. Активирующие мутации в гене PCSK9 приводят к усиленному разрушению LDLR и к гиперхолестеринемии. На мутации в гене PCSK9 приходится порядка 1-2% случаев СГ.

Литература:

1) Сафарова М.С., Сергиенко И.В., Ежов М.В., Семенова А.Е., Качковский М.А., Шапошник И.И. и др. Российская научно-исследовательская программа по своевременной диагностике и лечению больных семейной гиперхолестеринемией: обоснование и дизайн российского регистра семейной гиперхолестеринемии (РоСГХС). Атеросклероз и дислипидемия. 2014; (3): 7—15.

2) Пшеннова В.С. Семейная гиперхолестеринемия. Российский медицинский журнал, 2016; 22(5): 272—276. DOI 10.18821/0869-2106-2016-22-5-272-276.

3) Близнюк С.А., Бубнова М.Г., Ежов М.В. Семейная гиперхолестеринемия: современное состояние проблемы и лечебно­профилактическая помощь. Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2020;19(5):2532. doi:10.15829/1728­8800­2020 ­ 2532.

4) А. Б. Попова, Д. Н. Нозадзе, И. В. Сергиенко. Роль PCSK9 в генезе развития сердечно-сосудистых заболеваний. Атеросклероз и дислипидемии. №3 2016, стр. 5-14.

5) Goldberg A.C., Hopkins P.N., Toth P.P., Ballantyne C.M., Rader DJ., Robinson J.G., Daniels S.R., Gidding S.S., de Ferranti S.D., Ito M.K., McGowan M.P., Moriarty P.M., Cromwell W.C., Ross J.L., Ziajka P.E.; National Lipid Association Expert Panel on Familial Hypercholesterolemia. Семейная гиперхолестеринемия: скрининг, диагностика и лечение детей и взрослых пациентов: клиническое руководство, подготовленное группой экспертов по семейной гиперхолестеринемии при Национальной липидной ассоциации США. Атеросклероз и дислипидемии. №1 2012, стр. 4-11.

Взятие образцов венозной крови для исследования ДНК может производиться в любое время суток, прием пищи или специальная диета не повлияют на результат. 

Обращаем внимание, что на результаты исследования ДНК могут повлиять следующие факторы:

• переливание крови или трансплантация костного мозга, которые проводились в недавнем времени (в данном случае исследование ДНК не рекомендуется проводить в течение, как минимум, 1 месяца после трансплантации или переливания крови);
• контаминация образца чужим генетическим материалом (например, при взятии и транспортировке), поэтому все манипуляции с образцами биологического материала рекомендуется проводить в стерильных перчатках.

Взятие образцов буккального эпителия осуществляется в любое время суток. 

• Требуется воздержаться от еды, питья, а также курения за полчаса до сбора образцов.
• Непосредственно перед взятием образцов тщательно прополоскать рот чистой водой без использования гигиенических средств для полости рта. Подождать пару минут, чтобы во рту накопилась слюна.
• У детей, находящихся на грудном вскармливании, образцы следует брать через 30 минут после кормления.
• Непосредственно перед взятием образца младенцу необходимо дать попить воды из бутылочки.
• Перед взятием образца наденьте стерильные перчатки. Постарайтесь не дотрагиваться до конца зонда с щеточкой.

Обращаем внимание, что на результаты исследования ДНК могут повлиять следующие факторы:

контаминация образца чужим генетическим материалом (например, при взятии и транспортировке), поэтому все манипуляции с образцами биологического материала рекомендуется проводить в стерильных перчатках.

Для исключения взаимного переноса биологического материала образцы буккального эпителия должны храниться в отдельных пробирках и отдельных пакетах.

Для выполнения данного исследования используются образцы биологического материала двух типов: венозная кровь или буккальный эпителий (соскоб с внутренней поверхности щеки)

Венозная кровь

Тип пробирки: Вакуумная пробирка с ЭДТА

Минимальный объем биологического материала: 2 мл (допускается прием пробирок объемом 4-6 мл)

Процедура взятия биологического материала:

Взятие крови осуществляют из вены в положении пациента сидя или лежа. Кровь должна поступать свободным током непосредственно в вакуумную пробирку с ЭДТА (фиолетовая крышка). После взятия крови пробирку следует плавно перевернуть 5-10 раз для перемешивания с антикоагулянтом.

Центрифугирование: не требуется

Условия хранения: хранение биологического материала следует осуществлять при температуре +2…+8℃ (допускается накапливание биоматериала в заданном температурном режиме до 7 календарных дней). При более длительном хранении кровь необходимо заморозить при температуре -18…-23℃

Условия транспортировки:

Транспортировку биологического материала следует осуществлять при температуре +2…+8℃ в специальном термоконтейнере с хладагентом (синяя коробка). Замороженный биоматериал – при температуре -18…-23℃ в специальном термоконтейнере с хладагентом (красная коробка).

Не рекомендуется проводить повторное замораживание – оттаивание образцов

Буккальный эпителий (соскоб с внутренней поверхности щеки)

Взятие образцов буккального эпителия осуществляется с внутренней стороны щеки с использованием одноразовых зондов.

Требуется воздержаться от еды, питья, а также курения за полчаса до сбора образцов

Состав набора для взятия буккального эпителия:

• зонд с щеточкой, 2 шт.;
• стерильная емкость для зонда с щеточкой, 2 шт.;
• стерильные одноразовые перчатки, 1 пара;
• индивидуальный zip пакет, 1 шт.

Процедура взятия биологического материала:

Непосредственно перед взятием образцов необходимо тщательно прополоскать рот чистой водой без использования гигиенических средств для полости рта.

Подождите пару минут, чтобы во рту накопилась слюна. Наденьте стерильные перчатки. Аккуратно извлеките зонд из упаковки. Постарайтесь не дотрагиваться до конца зонда с щеточкой. Сделайте щеточкой 10-20 круговых движений по внутренней поверхности обеих щек. Извлеките зонд из ротовой полости, поместите его в стерильную сухую емкость, закройте крышку. Повторите эту процедуру вторым зондом. После взятия второго образца поместите второй зонд во вторую емкость. Обе емкости с зондами поместите в индивидуальный zip-пакет.

У детей, находящихся на грудном вскармливании, образцы следует брать через 30 минут после кормления. Непосредственно перед взятием образца младенцу необходимо дать попить воды из бутылочки.

Для исключения взаимного переноса биологического материала образцы должны храниться в отдельных пробирках и отдельных пакетах

Условия хранения : при температуре +18+25℃

Условия транспортировки: 

транспортировку биологического материала следует осуществлять при температуре +18+25℃