Иммуногистохимическое исследование прогностических маркеров экспрессия PD-L1 - раздела Подбор таргетной терапии

Эту систему могут использовать злокачественные опухоли для ухода от иммунного ответа. Опухолевые клетки экспрессируют (производят) PD-L1-белки, которые распознаются PD-1-рецепторами на поверхности Т-лимфоцитов, подавляя их атаку на опухоль.

Одним из перспективных методов иммунотерапии опухолей является подавление экспрессии PD-1 и PD-L1.

Экспрессия PD-L1 в опухолевых клетках — позитивный предиктивный (предсказательный) маркер ответа на иммунную терапию. Экспрессия определяется методом иммуногистохимического исследования (ИГХ). Метод ИГХ заключается в специфическом окрашивании исследуемых белков с помощью антител к ним. На основании полученных результатов принимается решение о дальнейшем лечении.

Иммунные контрольные точки — это семейства рецепторов (CTLA-4, PD-1) и лигандов (PD-L1, PD-L2), которые являются необходимым элементом системы активации иммунного ответа и его ограничения.

Взаимодействие рецептора PD-1 на Т-лимфоцитах с лигандом PD-L1 на опухолевых клетках и клетках опухолевого микроокружения приводит к увеличению иммуносупрессивного эффекта и способствует подавлению противоопухолевого иммунного ответа.

Иммунотерапия является одним из методов лечения злокачественных новообразований в онкологии. Одним из перспективных методов иммунотерапии является подавление экспрессии PD-1 и PD-L1. Экспрессия PD-L1 в опухолевых клетках — позитивный предиктивный маркер ответа на иммунную терапию.

Определение уровня экспрессии PD-L1 проводят с помощью иммуногистохимического исследования (ИГХ). Оценка осуществляется путем подсчета соотношения опухолевых клеток с позитивным окрашиванием мембраны к общему количеству опухолевых клеток, результат выражается в процентах. По уровню экспрессии PD-L1 выделены следующие группы: отрицательная (<1%) и позитивная (>1%) экспрессия, в группе с позитивной экспрессией выделена подгруппа с выраженной экспрессией (≥50%).

Определение уровня экспрессии PD-L1 и персонализированный подход к выбору терапии, основанный на результатах ИГХ тестирования, позволяет сделать лечение онкологических заболеваний более эффективным.

Для исследования ДНК используется предварительно подготовленный биологический материал (парафиновый блок с образцом ткани).

Непригодные для исследований образцы, приготовленные с использованием фиксаторов: Зенкера, Карнуа, Буэна, В-5, а также обработанные кислыми растворами, декальцифицирующими костную ткань.

По возможности образцы, предназначенные для выделения ДНК/РНК, не окрашивать (допустима окраска только крезилвиолетом).

 

Обращаем внимание, что на результаты исследования ДНК могут повлиять следующие факторы:

• в случае недостаточного объема пораженной ткани во взятом образце может быть получен ложноотрицательный результат;
• переливание крови или трансплантация костного мозга, стволовых клеток, органов и тканей, которые проводились в недавнем времени (в данном случае исследование ДНК не рекомендуется проводить в течение, как минимум, 1 месяца после трансплантации или переливания крови);
  
• контаминация образца чужим генетическим материалом (все манипуляции с образцами биологического материала рекомендуется проводить в стерильных перчатках)
  

Для выполнения данного исследования используются образцы ткани, зафиксированные в формалине и заключенные в парафиновый блок

 

Толщина образца

Оптимальная толщина образца ткани не должна превышать 5 мм

 

Заливка и фиксация биологического материала

Фиксацию препарата проводить при температуре +4...+10 °С, используя буферный раствор формалина. Процесс фиксации не должен превышать 24 часов (при фиксации ткани в течение 72 часов образуются необратимые сшивки в нуклеиновых кислотах, которые осложняют дальнейшие исследование ДНК/РНК). Соотношение количества формалина к ткани должно быть 10:1. Перед заливкой ткани в парафин нужно убедиться, что образец полностью обезвожен (остаточная вода может вызвать деградацию ДНК/РНК). Для заливки использовать парафин с низкой температурой плавления без примесей.

• По возможности образцы, предназначенные для выделения ДНК/РНК, не окрашивать (допустима окраска только крезилвиолетом).

• Непригодны для исследований образцы, приготовленные с использованием фиксаторов: Зенкера, Карнуа, Буэна, В-5, а также обработанные кислыми растворами, декальцифицирующими костную ткань.

 

Маркировка

На этикетке должна быть четко и разборчиво нанесена следующая информация, идентифицирующая образец биологического материала:

• фамилия, имя, отчество пациента;

• пол и возраст пациента;

• индивидуальный штрих-код пациента медицинского учреждения, если таковой имеется

 

Условия хранения

Парафинизированные образцы хранить в течение года при температуре от 0 до +10 °С (допустимо хранение при температуре +10 до +25°С) в специальном контейнере, предотвращающем попадание влаги и механические повреждения, при условии отсутствия попадания прямых солнечных лучей

 

Условия транспортировки

Транспортировку БМ следует осуществлять при температуре, соответствующей температуре хранения образца, в специальном контейнере, предотвращающем попадание влаги и механические повреждения, при условии отсутствия попадания прямых солнечных лучей

 

ВНИМАНИЕ!

Во избежание неопределенного результата генетические исследования не проводятся:

• после пересадки костного мозга, стволовых клеток, органов и тканей;
• после процедуры переливания крови в течение 3-х месяцев после проведения процедуры.