HLA-типирование 2 класса DQB1 - раздела HLA - типирование

HLA – антигены тканевой совместимости или главный комплекс гистосовместимости. Белки HLA (продукты экспрессии соответствующих генов) выполняют роль рецепторов на поверхности клеток, позволяющих организму распознавать собственные и чужие клетки. Гены комплекса HLA подразделяют на I (A,B,C) и II класс (DRB1, DQA1, DQB1, DPB1)

Гены HLA II класса экспрессируются в B-лимфоцитах, активированных T-лимфоцитах, моноцитах, макрофагах и дендритных клетках. Белковые продукты HLA II, обладающие мощными антигенными свойствами, играют важную роль в регуляции распознавания чужеродных агентов и являются необходимым участником многих иммунологических реакций, играя ключевую роль в развитии приобретенного иммунного ответа. Внутри генов HLA II класса выделяют 3 локуса, которые имеют наибольшее значение в клинической практике: DRB1 (более 400 аллельных вариантов), DQA1 (25 аллельных вариантов), DQB1 (57 аллельных вариантов). Каждый человек обладает индивидуальным набором HLA – молекул в связи с различием в составе HLA – генов, кодирующих эти молекулы.

Гены HLA-DQA1 и HLA-DQB1, локализованные на коротком плече шестой хромосомы человека, кодируют белок HLA-DQ. HLA-DQA1 и HLA-DQB1 являются частью рецептора главного комплекса гистосовместимости II класса и состоят из двух белковых цепей (DQA1 кодирует альфа-цепь белка, DQB1 кодирует бета-цепь белка). Генотипирование HLA II класса локус DQA1 обычно проводят одновременно с генотипированием HLA II класса локус DQВ1 в основном с целью установления возможного риска возникновения ряда заболеваний (сахарный диабет, ревматические заболевания и другие аутоиммунные заболевания, риск ранней потери беременности) и подбора доноров при трансплантации. Аллели DQB1*0302, DQB1*0201 + DQB1*0501 и DQA1*0501,0301 + DQB1*0201,*0302 связаны с сахарным диабетом первого типа. Резистентность к сахарному диабету 1-го типа связана с вариантом DQB1*0602. Аллели DQB1*0604/0605, DQA1 *0301, DQB1*03, DQA1*0101/0105 у матери являются факторами риска невынашивания беременности. Риск ранней потери беременности повышен в 2,68 раза при гомологии супругов на 50 процентов и более по двум локусам генов HLA II класса (DRB1 + DQA1), а при гомологии на 50 процентов и выше по трем локусам генов HLA II (DRB1 + DQA1 + DQB1) класса риск увеличивается в 13 раз. Более 95% больных целиакией имеют наследственную изоформу одного из двух типов HLA-DQ DQ2 или DQ8. Всего на сегодняшний день изучено семь вариантов HLA-DQ (DQ2 и DQ4-DQ9). Рецепторы этих генов образуют с пептидами глиадина более сильную связь, чем другие антиген-представляющие рецепторы, что приводит к активации Т-лимфоцитов и возникновению аутоиммунного процесса, что связано с повышением риска возникновения целиакии. В основном пациенты с целиакией являются носителями двух генов LA-DQ2, относящихся к гаплотипу DQ2.5. В случае наследования данного гаплотипа от обоих родителей риск возникновения целиакии особенно высок.

Взятие образцов венозной крови для исследования ДНК может производиться в любое время суток, прием пищи или специальная диета не повлияют на результат. 

Обращаем внимание, что на результаты исследования ДНК могут повлиять следующие факторы:

• переливание крови или трансплантация костного мозга, которые проводились в недавнем времени (в данном случае исследование ДНК не рекомендуется проводить в течение, как минимум, 1 месяца после трансплантации или переливания крови);
• контаминация образца чужим генетическим материалом (например, при взятии и транспортировке), поэтому все манипуляции с образцами биологического материала рекомендуется проводить в стерильных перчатках.

Взятие образцов буккального эпителия осуществляется в любое время суток. 

• Требуется воздержаться от еды, питья, а также курения за полчаса до сбора образцов.
• Непосредственно перед взятием образцов тщательно прополоскать рот чистой водой без использования гигиенических средств для полости рта. Подождать пару минут, чтобы во рту накопилась слюна.
• У детей, находящихся на грудном вскармливании, образцы следует брать через 30 минут после кормления.
• Непосредственно перед взятием образца младенцу необходимо дать попить воды из бутылочки.
• Перед взятием образца наденьте стерильные перчатки. Постарайтесь не дотрагиваться до конца зонда с щеточкой.

Обращаем внимание, что на результаты исследования ДНК могут повлиять следующие факторы:

контаминация образца чужим генетическим материалом (например, при взятии и транспортировке), поэтому все манипуляции с образцами биологического материала рекомендуется проводить в стерильных перчатках.

Для исключения взаимного переноса биологического материала образцы буккального эпителия должны храниться в отдельных пробирках и отдельных пакетах.

Для выполнения данного исследования используются образцы биологического материала двух типов: венозная кровь или буккальный эпителий (соскоб с внутренней поверхности щеки)

Венозная кровь

Тип пробирки: Вакуумная пробирка с ЭДТА

Минимальный объем биологического материала: 2 мл (допускается прием пробирок объемом 4-6 мл)

Процедура взятия биологического материала:

Взятие крови осуществляют из вены в положении пациента сидя или лежа. Кровь должна поступать свободным током непосредственно в вакуумную пробирку с ЭДТА (фиолетовая крышка). После взятия крови пробирку следует плавно перевернуть 5-10 раз для перемешивания с антикоагулянтом.

Центрифугирование: не требуется

Условия хранения: хранение биологического материала следует осуществлять при температуре +2…+8℃ (допускается накапливание биоматериала в заданном температурном режиме до 7 календарных дней). При более длительном хранении кровь необходимо заморозить при температуре -18…-23℃

Условия транспортировки:

Транспортировку биологического материала следует осуществлять при температуре +2…+8℃ в специальном термоконтейнере с хладагентом (синяя коробка). Замороженный биоматериал – при температуре -18…-23℃ в специальном термоконтейнере с хладагентом (красная коробка).

Не рекомендуется проводить повторное замораживание – оттаивание образцов

Буккальный эпителий (соскоб с внутренней поверхности щеки)

Взятие образцов буккального эпителия осуществляется с внутренней стороны щеки с использованием одноразовых зондов.

Требуется воздержаться от еды, питья, а также курения за полчаса до сбора образцов

Состав набора для взятия буккального эпителия:

• зонд с щеточкой, 2 шт.;
• стерильная емкость для зонда с щеточкой, 2 шт.;
• стерильные одноразовые перчатки, 1 пара;
• индивидуальный zip пакет, 1 шт.

Процедура взятия биологического материала:

Непосредственно перед взятием образцов необходимо тщательно прополоскать рот чистой водой без использования гигиенических средств для полости рта.

Подождите пару минут, чтобы во рту накопилась слюна. Наденьте стерильные перчатки. Аккуратно извлеките зонд из упаковки. Постарайтесь не дотрагиваться до конца зонда с щеточкой. Сделайте щеточкой 10-20 круговых движений по внутренней поверхности обеих щек. Извлеките зонд из ротовой полости, поместите его в стерильную сухую емкость, закройте крышку. Повторите эту процедуру вторым зондом. После взятия второго образца поместите второй зонд во вторую емкость. Обе емкости с зондами поместите в индивидуальный zip-пакет.

У детей, находящихся на грудном вскармливании, образцы следует брать через 30 минут после кормления. Непосредственно перед взятием образца младенцу необходимо дать попить воды из бутылочки.

Для исключения взаимного переноса биологического материала образцы должны храниться в отдельных пробирках и отдельных пакетах

Условия хранения : при температуре +18+25℃

Условия транспортировки: 

транспортировку биологического материала следует осуществлять при температуре +18+25℃